Дополнительные шаги для дезинфекции корневой канальной системы нижнего моляра: коррелятивный бактериологический, микро-компьютерно-томографический и крио-пульверизационный подход

Аннотация

Введение: Данное исследование оценивало дезинфицирующую способность химико-механической обработки с использованием ротационных никель-титановых инструментов, за которой следовали 2 различных дополнительных процедуры в корневых каналах экстрагированных нижних моляров с помощью корреляционного аналитического подхода.

Методы: Были выбраны двадцать два экстрагированных нижних моляра, анатомически сопоставленные между группами на основе микро-компьютерной томографической оценки. На первом этапе эксперимента корневые каналы были загрязнены Enterococcus faecalis и подвергнуты химико-механической обработке с использованием инструментов BT RaCe и орошения 2,5% NaOCl. Затем для дополнения дезинфекции использовался либо инструмент XP-Endo Finisher, либо пассивное ультразвуковое орошение. Микро-компьютерная томография использовалась для определения, коррелирует ли процент неподготовленных участков с количеством бактерий. На втором этапе те же зубы были снова загрязнены, и использовались дополнительные процедуры. Образцы из области истмуса мезиальных корней и апикального 5-мм фрагмента дистальных корней были получены с помощью криопульверизации. Образцы, взятые до и после этапов лечения в обоих фазах, были оценены с помощью количественной полимеразной цепной реакции и статистически проанализированы.

Результаты: На этапе 1 подготовка в обеих группах привела к значительному снижению бактериальных количеств (P < .001). Дополнительные методы привели к дальнейшему небольшому снижению бактерий, которое было значительным для XP-Endo Finisher (P < .05). Значительных различий между группами по сохраняющимся бактериальным количествам не наблюдалось. Корреляционный анализ не выявил статистически значимой связи между снижением бактерий и процентом неподготовленных участков (P > .05). На этапе 2 оба метода имели значительные антибактериальные эффекты в основном канале, но ни один из них не смог предсказуемо продезинфицировать области истмуса/углублений.

Выводы: Как XP-Endo Finisher, так и пассивная ультразвуковая ирригация продемонстрировали антибактериальную эффективность, но только первый метод вызвал значительное снижение бактериальных количеств после химико-механической подготовки. Ни один из них не был эффективен в предсказуемой дезинфекции областей истмуса/углублений. (J Endod 2016;42:1667–1672).

Независимо от методов инструментирования, инструментов и ирригантов, тщательная очистка, дезинфекция и формирование корневого канала не были достигнуты в большинстве случаев, особенно у зубов с изогнутыми каналами или необычной анатомией. Исследования, использующие технологии микрокомпьютерной томографии высокого разрешения (микро-КТ), показали, что 11%–48% основных областей корневого канала остаются нетронутыми после инструментирования. Эти области могут быть колонизированы биопленками, которые имеют потенциал оставаться не затронутыми и ставить под угрозу результат лечения. Более того, определенные анатомические сложности системы корневых каналов, такие как разветвления, углубления и истми, обычно не достигаются инструментами и ирригантами. Бактерии, находящиеся в этих областях, могут сохраняться и приводить к персистирующему апикальному периодонтиту. На самом деле, клинические бактериологические исследования показали, что бактерии все еще обнаруживаются примерно в 30%–60% каналов после химико-механической подготовки. Бактерии, сохраняющиеся в канале, являются самым важным фактором риска для постлечебного апикального периодонтита. Были предприняты усилия по разработке дополнительных подходов для улучшения дезинфекции корневых каналов. Это включает подходы, которые направляют ирриганты в труднодоступные области или позволяют инструменту достигать и механически очищать не затронутые участки. Одним из таких дополнительных подходов является пассивная ультразвуковая ирригация (ПУИ), которая включает ультразвуковую активацию ирриганта. Данные из in vitro и in vivo исследований, оценивающих преимущества в терминах антибактериальных эффектов дополнительного подхода ПУИ с NaOCl, были неопределенными.

Инструмент XP-Endo Finisher (FKG Dentaire, Ла-Шо-де-Фон, Швейцария) был недавно представлен с обещанием улучшить очистку и дезинфекцию корневых каналов. Это инструмент размером 25, не имеющий конусности, изготовленный из сплава никель-титан (NiTi) MaxWire (Martensite-Austenite Electropolish FleX). При комнатной температуре инструмент прямой в своей мартенситной фазе, но при температуре тела он переходит в аустенитную фазу и принимает форму ложки; при вращении и движении вверх и вниз в канале эта форма позволяет инструменту расширяться и сжиматься, касаясь стенок канала и перемешивая ирригационный раствор. Недавнее исследование показало, что XP-Endo Finisher и PUI успешно обеспечили значительно более низкие уровни твердых остатков в мезальном корневом канале по сравнению с традиционной ирригацией и модифицированным протоколом системы саморегулируемых файлов. На данный момент только 1 исследование изучало антибактериальные преимущества использования XP-Endo Finisher и сообщило о лучших результатах по сравнению с традиционной ирригацией. Ни одно исследование не оценивало антибактериальные эффекты этого инструмента после химико-механических процедур.

Настоящее исследование было направлено на оценку дезинфицирующей и формирующей способности химико-механической подготовки с использованием ротационных инструментов из NiTi, за которыми следовали 2 различных дополнительных подхода в корневых каналах экстрагированных нижних моляров с помощью корреляционного бактериологического и микро-КТ анализа. Для оценки бактериологических условий истмуса и углублений после использования либо инструмента XP-Endo Finisher, либо дополнительных процедур PUI был использован подход криопульверизации.

Материалы и методы

Выбор и подготовка зубов

Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом Университета Эстасио де Сау, Рио-де-Жанейро, RJ, Бразилия. Двадцать два экстрагированных нижних моляра с 2 независимыми каналами, соединенными апикально истмусом в медиальном корне (тип Вертуcci II) и одним дистальным каналом (тип Вертуcci I), были выбраны из коллекции 185 нижних моляров на основе рентгеновских снимков, сделанных в бокально-лингвальной и мезио-дистальной проекциях, исследования с помощью мелких файлов после подготовки доступа и микро-КТ визуализации с использованием сканера SkyScan 1174v2 (Bruker-microCT, Контрих, Бельгия), работающего на 50 кВ, 800 мА, изотропном разрешении 19,86 мм и 180^◦ вращении вокруг вертикальной оси с шагом вращения 1,0 с использованием алюминиевого фильтра толщиной 0,5 мм.

Изображения каждого образца были реконструированы с коррекцией кольцевых артефактов 5, коррекцией затвердевания пучка 15% и сглаживанием 5 (NRecon v.1.6.9.16; Bruker-microCT). Программное обеспечение CTAn v.1.14.4 (Bruker-microCT) использовалось для трехмерной (3D) оценки корневого канала по объему и площади поверхности, а программное обеспечение CTVol v.2.2.1 (Bruker-microCT) использовалось для визуализации и качественной оценки конфигурации системы корневых каналов. Образцы были парно сопоставлены на основе морфологических и анатомических аспектов мезиальных и дистальных систем корневых каналов, оцененных с помощью микро-КТ, и 1 образец из каждой пары был случайным образом назначен в одну из 2 экспериментальных групп.

Корневые каналы исследовались с помощью ручных K-файлов #15 до тех пор, пока кончик инструмента не достиг апикального отверстия, что визуализировалось с помощью стереомикроскопа. Эта мера была зафиксирована как длина проходимости, и каналы изначально расширялись до этой точки с использованием инструмента BioRaCe BR2 (25/04) (FKG Dentaire), работающего в моторе VDW Gold (VDW, Мюнхен, Германия) на 300 об/мин, 1.5 N • см, чтобы стандартизировать начальный диаметр канала и создать пространство для бактериального загрязнения. Слой налета был удален с помощью орошения 17% EDTA и 2.5% NaOCl. NaOCl был инактивирован 5% тиосульфатом натрия. Зубы были отсканированы снова в микро-КТ с использованием ранее упомянутых параметров, и полученные наборы данных использовались в качестве базового уровня для сравнения с изображениями после подготовки.

Этап 1

Для загрязнения корневые каналы были заполнены бульоном триптиказа сои (Difco, Детройт, Мичиган) с использованием игл Navitip (Ultradent Products Inc, Саут-Джордан, Юта), пока бульон не начал вытекать через апикальное отверстие. Зубы были помещены в колбу, содержащую 50 мл бульона триптиказа сои, и подвергнуты ультразвуковой обработке в течение 1 минуты, чтобы освободить захваченный воздух и позволить культуре проникнуть в неровности корневого канала. Затем зубы были стерилизованы в автоклаве. Свежая культура Enterococcus faecalis ATCC 29212, выращенная в течение 24 часов при 37^◦C, использовалась в качестве инокулята для загрязнения корневого канала. Зубы инкубировались в течение 30 дней при 37^◦C при легком встряхивании, и культуральная среда обновлялась каждую неделю. Позже все загрязненные зубы были освобождены от избыточной культуральной среды, и их внешние корневые поверхности были протерты стерильной марлей. Два зуба были зафиксированы в 10% буферном формалине и обработаны для сканирующей электронной микроскопии (СЭМ), чтобы подтвердить бактериальную колонизацию, как описано в других источниках.

Апикальные форамины каждого корня были запечатаны Topdam (FGM, Жоинвиль, SC, Бразилия), чтобы предотвратить апикальное бактериальное утечку и создать закрытую систему. Перед подготовкой корневого канала внешние поверхности корня были очищены 3% перекисью водорода и продезинфицированы 2.5% NaOCl, после чего последняя была инактивирована 5% натрия тиосульфатом. Зубы были установлены вертикально до шейной области в блоки из силиконового материала для оттисков (President Jet; Coltène AG, Куяога Фолс, OH). Коронка зуба, включая стенки пульповой камеры, и силиконовая поверхность были продезинфицированы 2.5% NaOCl, после чего это вещество было инактивировано 5% натрия тиосульфатом. Образцы были взяты из корневого канала с использованием бумажных точек до (P1S1) и после химико-механической подготовки (P1S2) и после дополнительного подхода (P1S3) (Рис. 1A). Корневой канал был промыт 1 мл стерильного 0.85% солевого раствора, чтобы удалить не прикрепленные клетки, и последовательно использовались 3–5 стерильных бумажных точек на рабочей длине (WL), которая была установлена на 0.5 мм от длины проходимости. Каждая бумажная точка оставалась в канале в течение 1 минуты. Бумажные точки были перенесены в трубки, содержащие 1 мл буфера Tris-EDTA (10 ммоль/л Tris-HCl, 1 ммоль/л EDTA, pH 7.6) и заморожены при -20◦C. В мезальном корне образцы были взяты из каждого канала, но они были объединены для дальнейшего бактериологического анализа, поскольку 2 канала сливались в 1 в апикальной части. Каналы были подготовлены на WL с использованием системы BT RaCe (FKG Dentaire), работающей в моторе VDW Gold на 600 об/мин, 1.5 N • см, до инструмента BT3. Ирригация проводилась с использованием 2.5% NaOCl, доставляемого иглами Navitip, которые вводились на 2 мм короче WL (Рис. 1A). Во время инструментирования мезальных каналов отверстие дистального канала было запечатано Topdam (и наоборот), чтобы избежать утечки ирригантов в него. После апикальной подготовки канал был промыт NaOCl, EDTA (для удаления слоя налета), а затем снова NaOCl (Рис. 1A). После инактивации NaOCl 5% натрия тиосульфатом образец P1S2 был взят, как описано выше, и зубы из каждой группы были подвергнуты либо PUI, либо дополнительным процедурам XP-Endo Finisher следующим образом.

PUI.

Корневые каналы промывали 2 мл 2,5% NaOCl, который ультразвуково активировался в канале в течение 1 минуты с использованием устройства EndoUltra (Vista Dental Products, Racine, WI), при этом наконечник зонда располагался на 1 мм короче рабочего длины. Каналы промывали 2 мл EDTA, который ультразвуково активировался так же, как и выше, после чего проводили финальное промывание 2,5% NaOCl. Наконец, NaOCl был инактивирован 2 мл 5% натрия тиосульфата, и был взят образец P1S3.

Инструмент XP-Endo Finisher.

XP-Endo Finisher использовался до рабочего уровня в течение 1 минуты после ирригации 2 мл 2,5% NaOCl. Инструмент был подключен к мотору VDW Gold на 800 об/мин, 1 Н • см, с медленными движениями вверх и вниз длиной 7-8 мм. Затем корневые каналы были промыты 17% EDTA, и XP-Endo был использован снова. После финальной ирригации 2,5% NaOCl и натрия тиосульфата был взят образец P1S3.

Для каждой группы использовался одинаковый конечный объем ирригантов, с 14 мл NaOCl на канал. В обеих группах ирриганты предварительно нагревались до 37^◦C для внутриканальных процедур, которые проводились при 37^◦C внутри шкафа с обогревателем (800-Heater; PlasLabs, Лансинг, Мичиган).

Образцы были автоклавированы и подвергнуты новому микрокомпьютерному томографическому сканированию с использованием вышеупомянутых параметров. Предоперационные и послеоперационные цветные 3D модели мезиальных каналов были созданы (CTVol v.2.2.1; Bruker-microCT) и совместно зарегистрированы с их соответствующими предоперационными наборами данных (зеленый и красный цвета указывают на предоперационные и послеоперационные поверхности канала соответственно) с использованием модуля жесткой регистрации программного обеспечения 3D Slicer 4.3.1 (доступно по адресу http://www.slicer.org), с точностью более 1 вокселя. Затем сопоставленные изображения были исследованы для расчета объема (мм³) и площади поверхности (мм²) мезиальной системы корневых каналов до и после подготовки с использованием программного обеспечения CTAn v.1.14.4 (Bruker micro-CT). Площадь нетронутой поверхности канала была определена путем подсчета количества статических вокселей и выражена в процентах от общего количества вокселей, присутствующих на поверхности канала.

Этап 2

Те же образцы зубов из этапа 1 были использованы на втором этапе эксперимента. В наличии оставалось восемь зубов. Этот второй этап был проведен для увеличения числа зубов с каналами, положительными на наличие бактерий, перед применением дополнительных методов, что позволило провести более надежное статистическое сравнение. Кроме того, стало возможным протестировать оба метода против более контролируемых начальных бактериальных нагрузок. Наконец, в этот второй эксперимент была включена оценка эффектов изолированного дополнительного метода на области истмуса.

Зубы были стерилизованы в автоклаве, загрязнены и установлены, как описано в этапе 1. Затем корневые каналы были промыты 1 мл физиологического раствора и снова инструментированы инструментом BT3, чтобы немного уменьшить начальную бактериальную нагрузку. P2S1 был взят, как на этапе 1. Каждый канал был промыт 2 мл 2,5% NaOCl, и использовался либо инструмент XP-Endo Finisher, либо PUI, как описано ранее (Рис. 1B). После промывания EDTA дополнительные методы были выполнены снова, а затем канал был промыт NaOCl и натриевым тиосульфатом. Образец P2S2 был собран.

На основе микрокомпьютерной томографии поперечного сечения корневых каналов была установлена позиция истмуса в медиальном корне, и образцы были отрезаны с использованием стерильных двусторонних алмазных дисков для получения корневых фрагментов, содержащих истмус, для анализа. Дистальные корни имели один плоский канал с углублениями и были сечены на 5 мм от апекса. Корневые фрагменты, соответствующие области истмуса медиального корня и апикальной части дистального корня, имели свои наружные поверхности очищены 3% перекисью водорода и дезинфицированы 2,5% NaOCl, который был дополнительно инактивирован тиосульфатом натрия. Последовательно наружные поверхности корней были отобраны с использованием стерильной бумажной точки #80, смоченной буфером Tris-EDTA. Этот образец служил контролем стерильности и оценивался с помощью количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (qPCR). Эти процедуры дезинфекции и контроля отбора образцов проводились под операционным микроскопом. Для криогенной измельчения каждого корневого фрагмента использовалась мельница 6750 (Spex, Metuchen, NJ), работающая при температуре жидкого азота, как описано в других источниках. После измельчения образцы порошка апикального корня (P2S3) были суспендированы в буфере Tris-EDTA и хранились при -20◦C.

Извлечение ДНК и qPCR анализ

ДНК была извлечена из образцов обеих экспериментальных фаз и использована в качестве шаблона для количественной оценки клеток E. faecalis с помощью qPCR анализа, нацеленного на ген 16S рРНК. Этапы извлечения ДНК и qPCR, контрольные образцы и условия были описаны ранее. Все измерения проводились в тройном экземпляре.

Статистический анализ

Для сравнения внутригруппового уменьшения бактериальных количеств от P1S1/P2S1 до P1S2/P2S2, P1S1/P2S1 до P1S3/P2S3 и P1S2/P2S2 до P1S3/P2S3 использовался тест Уилкоксона для связанных выборок. Начальные образцы (P1S1/P2S1) сравнивались между группами с использованием непараметрического теста Манна-Уитни U теста, который не показал значительных различий между ними (P> .05). Поэтому тот же тест использовался для сравнения количеств в образцах P1S2/P2S2 и P1S3/P2S3 между группами. Изначально анализы проводились для мезиальных и дистальных корней отдельно. Поскольку значительных различий между мезиальными и дистальными каналами не было, данные также были собраны для увеличения надежности статистического анализа. Для проверки взаимосвязей между уменьшением бактерий и процентом неподготовленных участков использовался анализ корреляции Пирсона. Статистические анализы проводились с помощью STATISTICA версии 8 (StatSoft, Талса, ОК) с уровнем значимости, установленным на 5%.

Результаты

Анализ SEM показал, что E. faecalis колонизировал стенки корневого канала, в основном образуя структуры, похожие на биопленку (данные не показаны). Колонизация корневого канала была дополнительно подтверждена положительными результатами qPCR в образцах P1S1/P2S1 от всех зубов.

Этап 1

Таблица 1 показывает среднее, медиану и диапазон количеств E. faecalis , наблюдаемых для тестовых групп. В группе XP-Endo Finisher количества E. faecalis были значительно снижены с P1S1 до P1S2 (P < .001). После использования инструмента XP-Endo (P1S3) произошло дополнительное значительное снижение (P < .05). Все 20 образцов были положительными на E. faecalis в P1S1, 6 в P1S2 и 6 в P1S3. В группе PUI начальные бактериальные количества (P1S1) также были значительно снижены после подготовки (P1S2) (P < .001). Хотя бактериальные количества были дополнительно снижены в P1S3, они не отличались значительно от P1S2 (P > .05). Все 20 образцов были положительными в P1S1, 10 в P1S2 и 7 в P1S3. Значительных различий не было обнаружено при сравнении P1S3 между группами XP-Endo и PUI (P > .05).

Статистический анализ данных мезиальных и дистальных каналов отдельно показал отсутствие значимости для всех сравнений между P1S2 и P1S3 (P > .05), за исключением мезиальных каналов в группе XP-Endo Finisher (P < .05). Данные по мезиальным и дистальным корням представлены в Дополнительной таблице S1.

Анализ с помощью микро-КТ не показал значительных различий в начальных объемах каналов между группами (P > .05). Что касается неподготовленных участков, среднее процентное значение статических вокселей составило 4.5% (медиана, 4.3%) для группы XP-Endo Finisher и 4.3% (медиана, 5.4%) для группы PUI (P > .05) (Рис. 2). Корреляционный анализ не выявил статистически значимой связи между снижением бактериальной нагрузки и процентом неподготовленных участков (P > .05).

Этап 2

Таблица 2 изображает количественные данные с этапа 2. В группе XP-Endo Finisher количество E. faecalis в P2S1 было значительно снижено после использования этого инструмента (P< .001). Все 18 образцов были положительными на наличие бактерий в P2S1, 2 в P2S2 и 4 в P2S3 (порошкообразные образцы). Процедура PUI также была высокоэффективной в снижении бактериальных количеств в основном канале (P< .001). Все 18 образцов были положительными на наличие бактерий в P2S1, 1 в P2S2 и 6 в P2S3 (порошкообразные образцы). Значительных различий не было обнаружено при сравнении эффектов XP-Endo и PUI в P2S2 (основные каналы) или P2S3 (истмусы/углубления) (P> .05). Статистический анализ данных по мезиальным и дистальным образцам отдельно также не показал значительных различий между группами (P> .05) (Дополнительная таблица S2).

Обсуждение

Это исследование коррелировало различные аналитические инструменты для оценки, в 2 экспериментальных фазах, антибактериальных эффектов дополнительных подходов в системе корневых каналов нижних моляров. В первой фазе оценивались эффекты 2 процедур, использованных сразу после химико-механической подготовки с ротационным инструментом NiTi и ирригацией NaOCl. Этот анализ был ограничен антибактериальными эффектами в основном корневом канале, определяемыми с помощью пробирок с бумажными точками. Поскольку 50% (группа PUI) и 70% (группа XP-Endo Finisher) случаев показали отрицательные результаты на наличие бактерий в P1S2, размер выборки для межгруппового анализа P1S3 был уменьшен, и была разработана вторая фаза для увеличения числа каналов, подвергшихся обоим подходам, и включения анализа их эффектов не только в основных каналах, но также в истмусах и углублениях путем криогенной шлифовки корня для взятия образцов.

В первой фазе химико-механическая инструментальная обработка с BT RaCe и ирригацией NaOCl способствовала значительному устранению бактерий в обеих группах, что согласуется с предыдущими исследованиями. В то время как дополнительный этап процедуры с PUI не смог значительно снизить количество бактерий, внутриконтурные E. faecalis после использования XP-Endo Finisher были значительно ниже, чем те, которые были получены сразу после подготовки. Значительно лучшие результаты для XP-Endo наблюдались в мезиальных корнях. Во второй фазе начальные образцы состояли из начальной более низкой бактериальной нагрузки, чтобы позволить сравнение обоих подходов с бактериальными числами, совместимыми с тем, с чем ожидается, что дополнительные процедуры столкнутся в клинической ситуации. В этой фазе подходы PUI и XP-Endo Finisher были схожи и высокоэффективны в снижении бактериальных чисел в основном канале.

Что касается областей перешейка/углублений, разрушительный характер подхода к криопульверизации не позволил провести продольный анализ. Поэтому невозможно сделать вывод о том, были ли отрицательные результаты следствием воздействия дополнительных методов или неудачного бактериального загрязнения в этих областях. Однако значительных различий в бактериальных подсчетах между группами не было. Подсчеты в области перешейка (P2S3) действительно были выше, чем в основном канале (P2S2), что предполагает, что эффекты PUI и XP-Endo Finisher в этом регионе непредсказуемы. Это, наряду с находками нескольких зубов с образцами, отрицательными в канале и положительными в перешейке, подчеркивает ограничение подхода с использованием бумажных точек при отборе проб из системы корневого канала.

Общие результаты для инструмента XP-Endo Finisher были обнадеживающими, поскольку он в целом показал сопоставимые результаты с PUI, широко рекомендуемым дополнительным методом. В недавнем исследовании инструмент XP-Endo Finisher оказался более эффективным, чем другие техники, в дезинфекции пространства основного канала. Дизайн и спиральное движение инструмента, возможно, позволили ему достичь ранее не затронутых областей и сместить бактериальные биопленки. Увеличение затронутых областей не оценивалось с помощью микро-КТ из-за минимальной, если таковая имеется, способности резать у инструмента XP-Endo Finisher.

Наши результаты с PUI согласуются с несколькими исследованиями, которые сообщили о незначительном улучшении дезинфекции после подготовки. Антибактериальные эффекты PUI предполагается связать с кавитацией, акустическим потоком и нагревом ирриганта, но если эти явления действительно происходят в корневом канале, они, похоже, не достаточны для значительного повышения элиминации бактерий.

Не было обнаружено корреляции между процентом неподготовленных участков и уровнями бактерий в P1S3, что согласуется с предыдущим исследованием. Существует возможность, что в некоторых образцах нетронутые участки главного канала могли не быть колонизированы бактериями. Более того, возможно, что неинструментированные участки действительно были дезинфицированы ирригацией NaOCl. Ограничения процедуры выборки в статье также могли объяснить эту нехватку корреляции.

Настоящий экспериментальный дизайн имеет несколько примечательных аспектов. Для выбора и сопоставления зубов в соответствии с анатомическими сходствами использовались микрокомпьютерные томограммы, что минимизировало переменные, присущие анатомии, перед распределением между группами. Кроме того, в ходе экспериментов использовались подогретые ирриганты. Это было необходимо, поскольку инструмент XP-Endo Finisher подвергается фазовому превращению при температуре тела. Затем мы решили включить подогретые растворы на всех этапах эксперимента, который также проводился в шкафу с температурой, поддерживаемой на уровне 37^◦C. Большинство предыдущих исследований на экстрагированных зубах проводились при комнатной температуре. Поскольку температура может влиять на антибактериальную активность NaOCl, рекомендуется проводить антибактериальные тесты при температуре, аналогичной температуре тела. Еще одним преимуществом этого исследования было использование qPCR для количественной оценки бактерий. Этот подход очень чувствителен и может быть надежно использован в криопорошковых образцах (пилотные исследования, использовавшие культуру, показали потерю бактериальных подсчетов из-за метода измельчения). Использование криопорошковки, в свою очередь, было необходимо для анализа антибактериальных эффектов протестированных подходов в таких областях, как истми и углубления, которые могут быть неправильно выбраны с помощью бумажных точек.

Хотя это исследование является инновационным в сочетании различных аналитических подходов, у него также есть ограничения. Забор образцов с помощью бумажных точек обычно ограничивается главным каналом, и некоторые области, такие как неровности, истми и углубления, могут не быть охвачены. Ограничение техники бумажной точки было очевидно на этапе 2, когда больше каналов были положительными на наличие бактерий в P2S3, чем в P2S2; также были показаны более высокие средние показатели для P2S3. Кроме того, поскольку забор образцов с помощью бумажной точки не различает сегмент главного канала, остается неизвестным, в какой части остались бактерии. Криопульверизация может обойти эти ограничения, но это разрушительный метод и может использоваться только для поперечного анализа. Другим ограничением может быть использование qPCR для обнаружения бактерий. Существует опасение, что ДНК из клеток, которые недавно погибли в результате антибактериального лечения, также может быть обнаружена этим методом. Тем не менее, предыдущее исследование, использующее аналогичный in vitro протокол, не показало значительной разницы в количестве бактерий между культурой и qPCR в образцах после лечения. Это, наряду с высокой частотой отрицательных результатов qPCR в образцах после лечения, сильно указывает на то, что ДНК мертвых клеток, возможно, не была значительной проблемой в данном исследовании. Свободная ДНК может быть разрушена NaOCl или могла быть смыта во время ирригации.

В заключение, это исследование показало, что оба вспомогательных подхода вызвали небольшое снижение бактериальных количеств после химико-механической подготовки, что было значимо только для XP-Endo Finisher. Ни XP-Endo, ни PUI не были эффективны в предсказуемой дезинфекции истмусных/рецессных областей нижних моляров.

Авторы: Флавио Р.Ф. Алвес, Карлос В. Андраде-младший, Марилия Ф. Марселиано-Алвес, Алехандро Р. Перес, Изабела Н. Рокас, Марко А. Версиани, Мануэл Д. Соуса-Нето, Хосе С. Провенцано, Хосе Ф. Сикейра

Ссылки:

1. Сикейра Дж.Ф. мл., Араужо М.Ц., Гарсия П.Ф. и др. Гистологическая оценка эффективности пяти техник инструментирования для очистки апикальной трети корневых каналов. J Endod 1997;23:499–502.
2. Петерс О.А., Шененбергер К., Лайб А. Влияние четырех техник подготовки Ni-Ti на геометрию корневого канала, оцененное с помощью микро-компьютерной томографии. Int Endod J 2001;34: 221–30.
3. Вера Дж., Сикейра Дж.Ф. мл., Рикукки Д. и др. Одно- и двухвизитное эндодонтическое лечение зубов с апикальным периодонтитом: гистобактериологическое исследование. J Endod 2012;38: 1040–52.
4. Паке Ф., Цендер М., Де-Деус Г. Сравнение на основе микротомографии техники рециркуляции с использованием одного файла F2 ProTaper и ротационной полной последовательности. J Endod 2011; 37:1394–7.
5. Маркварт М., Дарванн Т.А., Ларсен П. и др. Микро-CT анализы апикального расширения и сложности корневых каналов моляров. Int Endod J 2012;45:273–81.
6. Сикейра Дж.Ф. мл., Алвес Ф.Р., Версиани М.А. и др. Корреляционный бактериологический и микро-компьютерный томографический анализ мезиальных каналов нижних моляров, подготовленных с помощью саморегулируемого файла, системы Reciproc и системы Twisted File. J Endod 2013;39:1044–50.
7. Петерс О.А., Ариас А., Паке Ф. Оценка подготовки корневого канала с помощью нового инструмента TRUShape в мезиальных корнях нижних моляров с использованием микро-компьютерной томографии. J Endod 2015;41:1545–50.
8. Рикукки Д., Сикейра Дж.Ф. мл. Биопленки и апикальный периодонтит: исследование распространенности и связи с клиническими и гистопатологическими находками. J Endod 2010;36:1277–88.
9. Рикукки Д., Сикейра Дж.Ф. мл., Бейт А.Л., Питт Форд Т.Р. Гистологическое исследование зубов, обработанных корневым каналом с апикальным периодонтитом: ретроспективное исследование двадцати четырех пациентов. J Endod 2009;35:493–502.
10. Пайва С.С., Сикейра Дж.Ф. мл., Рокас И.Н. и др. Дополнение антимикробных эффектов химико-механической очистки либо пассивной ультразвуковой ирригацией, либо финальным промыванием с хлоргексидином: клиническое исследование. J Endod 2012;38:1202–6.
11. Бистром А. Оценка эндодонтического лечения зубов с апикальным периодонтитом [стоматологическая диссертация № 27]. Умео, Швеция: Университет Умео; 1986.
12. Вианна М.Е., Хорц Х.П., Гомес Б.П., Конрадс Г. Оценка микробного снижения после химико-механической подготовки человеческих корневых каналов с некротической пульпой in vivo. Int Endod J 2006;39:484–92.
13. Сйогрен У. Успех и неудача в эндодонтии [стоматологическая диссертация № 60]. Умео, Швеция: Университет Умео; 1996.
14. Невес М.А., Провенцано Дж.С., Рокас И.Н., Сикейра Дж.Ф. мл. Клиническая антибактериальная эффективность подготовки корневого канала с использованием рециркулирующей системы с одним инструментом или многими инструментами с непрерывным вращением. J Endod 2016;42:25–9.
15. Сикейра Дж.Ф. мл., Рокас И.Н. Клинические последствия и микробиология бактериальной устойчивости после процедур лечения. J Endod 2008;34:1291–13013.
16. Сикейра Дж.Ф. мл., Рокас И.Н. Оптимизация дезинфекции за одно посещение с дополнительными подходами: поиск предсказуемости. Aust Endod J 2011;37:92–8.
17. Алвес Ф.Р., Алмейда Б.М., Невес М.А. и др. Дезинфекция овальных корневых каналов: эффективность различных дополнительных подходов. J Endod 2011;37:496–501.
18. Тардиво Д., Поммель Л., Ла Скола Б. и др. Антибактериальная эффективность пассивной ультразвуковой и звуковой ирригации: ультразвуковая ирригация корневого канала. Odontostomatol Trop 2010;33:29–35.
19. Карвер К., Нустейн Дж., Ридер А., Бек М. Внутри живого организма антибактериальная эффективность ультразвука после ручного и ротационного инструментирования в человеческих нижних молярах. J Endod 2007; 33:1038–43.
20. Пайва С.С., Сикейра Дж.Ф. мл., Рокас И.Н. и др. Молекулярная микробиологическая оценка пассивной ультразвуковой активации как дополнительного дезинфицирующего этапа: клиническое исследование. J Endod 2013;39:190–4.
21. Дебелиан Г., Тропе М. Очистка третьего измерения. Эндодонтическая практика 2015;8: 22–4.
22. Леони Г.Б., Версиани М.А., Силва-Соуса Й.Т. и др. Экспериментальная оценка четырех протоколов финальной ирригации на удаление твердых остатков из мезиальной системы корневых каналов нижних первых моляров. Int Endod J 2016 Mar 18. http://dx.doi.org/ 10.1111/iej.12630. [Epub ahead of print].
23. Азим А.А., Аксель Х., Чжуан Т. и др. Эффективность 4 протоколов ирригации в уничтожении бактерий, колонизированных в дентинных канальцах, исследованная с помощью нового анализа конфокальной лазерной сканирующей микроскопии. J Endod 2016;42:928–34.
24. Сикейра Дж.Ф. мл., Алвес Ф.Р., Алмейда Б.М. и др. Способность химико-механической подготовки с использованием ротационных инструментов или саморегулируемого файла дезинфицировать овальные корневые каналы. J Endod 2010;36:1860–5.
25. Алвес Ф.Р., Сикейра Дж.Ф. мл., Кармо Ф.Л. и др. Профилирование бактериального сообщества образцов, криогенно измельченных из апикальных и корональных корневых сегментов зубов с апикальным периодонтитом. J Endod 2009;35:486–92.
26. Антунес Х.С., Рокас И.Н., Алвес Ф.Р., Сикейра Дж.Ф. мл. Общие и специфические бактериальные уровни в апикальной системе корневого канала зубов с постлечебным апикальным периодонтитом. J Endod 2015;41:1037–42.
27. Алвес Ф.Р., Рокас И.Н., Алмейда Б.М. и др. Количественный молекулярный и культурный анализы бактериальной элиминации в овальных корневых каналах с помощью техники инструментирования с одним файлом. Int Endod J 2012;45:871–7.
28. ван дер Слуис Л.В., Верслуис М., Ву М.К., Весселинк П.Р. Пассивная ультразвуковая ирригация корневого канала: обзор литературы. Int Endod J 2007;40:415–26.
29. Мартин Х. Ультразвуковая дезинфекция корневого канала. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 1976;42:92–9.
30. Ахмад М., Питт Форд Т.Р., Крам Л.А. Ультразвуковая очистка корневых каналов: взгляд на вовлеченные механизмы. J Endod 1987;13:93–101.
31. Сиртес Г., Вальтимо Т., Шаэтцле М., Цендер М. Влияние температуры на краткосрочную стабильность гипохлорита натрия, способность к растворению пульпы и антимикробную эффективность. J Endod 2005;31:669–71.
32. Сикейра Дж.Ф. мл., Рокас И.Н. Использование молекулярных методов для изучения эндодонтических инфекций: часть 1—современные молекулярные технологии для микробиологической диагностики. J Endod 2005;31:411–23.
33. Маккарт С.Ц., Атлас Р.М. Влияние размера ампликонов на ПЦР-детекцию бактерий, подвергшихся воздействию хлора. PCR Methods Appl 1993;3:181–5.
34. Фуад А.Ф., Барри Дж. Влияние антибиотиков и эндодонтических антимикробных средств на полимеразную цепную реакцию. J Endod 2005;31:510–3.